## 1. Confocal Microscope LSM 980 ### 특징 - 초고감도 32 channel spectral GaAsP-PMT detector 탑재 - 약한 시그널도 선명하게 이미징 가능 - Crosstalk 현상 없이 multi-spectral imaging 가능 - Airyscan2 mode로 X, Y, Z 축 1.7~2배 해상도 향상 ### 핵심 사용법 1. **시스템 시작** - 레이저, 컴퓨터, 현미경 본체 순으로 전원 켜기 - ZEN 소프트웨어 실행 후 로그인 2. **샘플 준비 및 장착** - 슬라이드 고정 클립으로 샘플 고정 - 오일 사용 시 적정량만 사용 (과다 사용 주의) 3. **이미징 설정** - Acquisition 탭에서 레이저 선택 및 강도 조절 - 형광 채널별 detector 감도 및 파장 범위 설정 - Z-stack 촬영 시 상/하한 설정 후 간격 지정 4. **Airyscan2 모드 활성화** - Acquisition 탭에서 Airyscan 모드 선택 - 이미지 최적화를 위한 Airyscan 파라미터 조정 - Processing 탭에서 Airyscan 이미지 프로세싱 실행 5. **데이터 저장 및 시스템 종료** - 이미지는 CZI 형식으로 저장 - 시스템 종료 시 레이저 끄기 → 소프트웨어 종료 → 컴퓨터 종료 → 현미경 전원 차단 ## 2. Confocal Microscope LSM 780 ### 특징 - PMT보다 약 2배 이상의 감도를 가진 GaAsP detector 장착 - 저발현 단백질이나 약한 신호 감지 가능 - 23개 detector로 형광물질의 스펙트럼 신속 분석 ### 핵심 사용법 1. **시스템 준비** - 레이저 냉각기 확인 후 전원 켜기 - ZEN 소프트웨어 실행 2. **레이저 및 검출기 설정** - Smart Setup에서 형광체 선택 - 채널별 레이저 강도 및 검출 범위 설정 - 고감도 모드 활성화 방법: Channels 탭에서 GaAsP 선택 3. **스캔 파라미터 조정** - 스캔 속도, 해상도, 픽셀 시간 설정 - 이미지 평균화(averaging) 횟수 설정으로 노이즈 감소 4. **스펙트럼 분석** - Lambda mode 선택 후 스캔 범위 설정 - 선택 영역에서 스펙트럼 프로파일 추출 - Linear unmixing으로 겹치는 형광 신호 분리 ## 3. Confocal Microscope LSM 710 ### 특징 - 뛰어난 감도 - 7종류 레이저 광원 장착으로 다양한 형광시료에 적합 - 최상의 이미징 가능 ### 핵심 사용법 1. **시스템 초기화** - 컴퓨터 및 현미경 전원 켜기 - ZEN 소프트웨어 실행 및 시스템 초기화 대기 2. **광원 및 필터 설정** - 필요한 레이저 선택 (405, 458, 488, 514, 561, 594, 633nm) - 다이크로익 미러 및 필터 셋 선택 3. **이미지 획득** - 이미지 크기, 비트 깊이, 스캔 방향 설정 - 핀홀 크기 조절 (광학 절편 두께 결정) - Time series 또는 Z-stack 모드 설정 4. **이미지 후처리** - 노이즈 감소 필터 적용 - 이미지 컨트라스트 및 밝기 조정 - 채널 간 색상 조정 및 병합 ## 4. Confocal Microscope LSM 700 ### 특징 - 4가지 레이저 (405, 488, 555, 639) 광원 장착 - 사용법이 비교적 간단 - z-stack, tile scan 등 고해상도 형광이미지 획득 ### 핵심 사용법 1. **기본 설정** - 전원 켜고 10분 예열 - 대물렌즈 선택 (10x, 20x, 40x, 63x) 2. **샘플 관찰** - Locate 탭에서 밝은 시야로 샘플 위치 확인 - 초점 조절 후 형광 모드 전환 3. **이미징 최적화** - Range Indicator 사용하여 최적 레이저 강도 설정 - Smart Setup으로 채널 간 간섭 최소화 4. **고급 이미징** - Tile scan: Navigation 탭에서 영역 지정 - Z-stack: Z-Stack 탭에서 First/Last 위치 설정 - Time series: Time Series 탭에서 간격과 횟수 설정 5. **데이터 내보내기** - 이미지 처리 후 TIFF, JPEG 등으로 내보내기 - 분석 소프트웨어 호환 형식 선택 ## 5. Two-photon Microscope FVMPE ### 특징 - 적외선 파장대의 femtosecond lasers 사용 - 조직 깊은 곳까지 excitation 가능 - 극대화된 detection sensitivity - Intravital imaging에 최적화 ### 핵심 사용법 1. **레이저 준비** - Mode-lock 확인 (Tsunami 및 MaiTai 레이저) - 파장 설정 (일반적으로 800-950nm) 2. **샘플 준비** - 적합한 챔버에 샘플 고정 - 생체 샘플의 경우 생리학적 환경 유지 3. **이미지 획득 설정** - Galvano/Resonant 스캐너 선택 - PMT 게인 및 오프셋 조정 - Wavelength mixing으로 다중 형광체 이미징 4. **심부 조직 이미징** - Z 보정 기능으로 깊이에 따른 레이저 파워 자동 조정 - 깊이에 따른 디텍터 감도 최적화 5. **장시간 생체 이미징** - 온도 및 CO2 제어 설정 - 타임랩스 간격 및 총 시간 설정 - 광독성 최소화를 위한 레이저 파워 최적화 ## 6. THUNDER Imager ### 특징 - 8개 LED 광원 장착으로 다양한 형광 이미징 - H&E staining 등 면역 염색 시료의 컬러 촬영 가능 - 고속 촬영으로 live imaging 및 큰 시료 촬영에 유리 - Computational clearing 기술로 두꺼운 조직에서도 선명한 이미지 ### 핵심 사용법 1. **시스템 설정** - LED 광원 예열 (약 5분) - LAS X 소프트웨어 실행 2. **이미징 모드 선택** - Widefield: 일반 형광 이미징 - THUNDER: 두꺼운 샘플 또는 배경 제거 필요 시 - Live: 실시간 세포 관찰 시 3. **Computational Clearing 설정** - 샘플 유형에 따라 Small Volume, Large Volume, Assay 중 선택 - Rolling Ball 배경 제거 강도 조절 - Deconvolution 강도 설정 4. **대용량 샘플 이미징** - Navigator로 전체 샘플 맵 생성 - 관심 영역 설정 및 자동 타일 스캔 - 자동 스티칭으로 전체 이미지 합성 5. **시계열 이미징** - 자동 초점 유지 설정 - 시간 간격 및 총 촬영 시간 설정 - 환경 제어 모듈 설정 (온도, CO2, 습도)